آزمون اندوتوکسین نانومواد در سیستم‌های برون‌تن – روش آزمون Limulus Amebocyte Lysate (LAL)
Nanotechnologies - Endotoxin Test on Nanomaterial Samples for in Vitro Systemslumulus Amebocyte Lysate (LAL) Test
شماره:
14153
سال انتشار:
1390
اندوتوکسین‌ها لیپوپلی ساکاریدها قسمتی از لایه خارجی دیواره سلولی باکتری‌های گرم منفی هستند. مانند اشرشیاکلای سالمونلا شیگلا سودوموناس، نیسریا و هموفیلوس اندوتوکسین‌ها می‌توانند سبب واکنش‌های سیستمیک مختلفی مانند ،تب، انعقاد منتشر داخل عروقی، کاهش فشارخون شوک و مرگ در پستانداران و انسان. شوند این پاسخ‌ها بوسیله تولید انواع مختلفی از سایتوکاین‌ها فعال شدن مسیرهای آبشاری کمپلمان‌ها فعال شدن مسیرهای آبشاری انعقادی و غیره رخ می‌دهند اندوتوکسین‌ها در محیط های عادی هم وجود دارند. با توجه به اینکه بیشتر نمونه‌های نانومواد که به منظور انجام آزمون‌های برون تن و یا درون تن انتخاب می‌شوند نیازمند فرایندهای آماده‌سازی مختلفی هستند در صورت عدم مراقبت ویژه ممکن است بوسیله اندوتوکسین‌ها آلوده شوند.
به منظور غربالگری سمیت یا انجام آزمون‌های سازگاری زیستی نانومواد، یا مطالعات روی مکانیسم‌های احتمالی سمیت القا شده بوسیله آن‌ها انواع روش‌های آزمون سلولی برون تن و درون تن توسعه یافته و بکار گرفته شده‌اند در روش‌های آزمون‌های برون تن اغلب ماکروفاژها و یا سایر سلول‌های مربوط به پستانداران به‌عنوان سلول‌های مورد آزمون برای نانو مواد استفاده می‌شوند زیرا سلول‌های مذکور عامل اولیه حفظ و بقای سلول‌ها در بدن هستند از آنجائیکه سلول‌های ماکروفاژی به اندوتوکسین‌ها واکنش‌های شدیدی نشان می‌دهند لذا تشخیص اینکه این پاسخ مربوطه به واکنش اندوتوکسین است یا نانو مواد مشکل است.
در نتیجه آلودگی با اندوتوکسین‌ها می‌تواند نتایج آزمون‌های برون تن را با اشکال مواجه کند. اگر در هنگام آماده‌سازی نمونه‌های آزمون احتیاط رعایت شود احتمالا آلودگی با اندوتوکسین‌ها کاهش می‌یابد بنابراین برای به حداقل رساندن آلودگی و یا به قطعیت رساندن مقادیر ناچیز اندوتوکسین‌ها در نمونه آزمون تشخیص مقدماتی آن‌ها ضروری است برای تفسیر مناسب داده‌هایی که از آزمون برون تن بدست می‌آید بسیار مهم است که مقدار اندوتوکسین‌ها تعیین شود. از آنجائیکه اندوتوکسین‌ها می‌توانند تجهیزات پزشکی و یا داروهای تزریقی را آلوده کنند. روش‌های اندازه‌گیری نیمه کمی و کمی اندوتوکسین‌ها به دوشکل برون تن و درون تن توسعه یافته‌اند. (به پیوست ث مرجع مراجعه کنید آزمون اندوتوکسین باکتریال با استفاده از واکنشگر (Limulus amcbocyte lysate (LAL بعنوان یک روش برون تن جهت ارزیابی آلودگی به اندوتوکسین‌ها توسعه یافته است این آزمون می‌تواند روش جایگزینی برای آزمون تبزایی در خرگوش‌ها و سایر روش‌های شرح داده شده در فارماکوپه بسیاری از کشورها باشد. این استاندارد نکاتی را ارائه می‌کند که برای آزمون LAL جهت نانومواد بکار رفته در انجام آزمون‌های بیولوژیکی برون تن استفاده می‌شود.
هدف از تدوین این استاندارد
هدف از تدوین این استاندارد ارائه کاربرد یک آزمون با استفاده از واکنشگر LAL جهت ارزیابی تانو مواد مورد نظر در سیستم‌های آزمون‌های بیولوژیکی برون تن بر پایه سلولی می‌باشد. این آزمون برای استفاده نمونه‌های نانو مواد توزیع شده در محیط‌های آبی مانند آب، سرم، یا محیط واکنش و همچنین محیط‌های گرم‌خانه گذاری شده با نانومواد برای یک دوره زمانی لازم در ۳۷C مناسب است. این استاندارد به نمونه‌های آزمون برای سیستم‌های برون تن محدود می‌شود اما روش‌های ارائه شده همچنین می‌توانند برای نانو مواد تزریق شده به حیوانات هم تعمیم یابند.
شماره استاندارد ملی ایران:
14153
سال انتشار:
1390
آزمون اندوتوکسین نانومواد در سیستم‌های برون‌تن – روش آزمون Limulus Amebocyte Lysate (LAL)
Nanotechnologies - Endotoxin Test on Nanomaterial Samples for in Vitro Systemslumulus Amebocyte Lysate (LAL) Test
اندوتوکسین‌ها لیپوپلی ساکاریدها قسمتی از لایه خارجی دیواره سلولی باکتری‌های گرم منفی هستند. مانند اشرشیاکلای سالمونلا شیگلا سودوموناس، نیسریا و هموفیلوس اندوتوکسین‌ها می‌توانند سبب واکنش‌های سیستمیک مختلفی مانند ،تب، انعقاد منتشر داخل عروقی، کاهش فشارخون شوک و مرگ در پستانداران و انسان. شوند این پاسخ‌ها بوسیله تولید انواع مختلفی از سایتوکاین‌ها فعال شدن مسیرهای آبشاری کمپلمان‌ها فعال شدن مسیرهای آبشاری انعقادی و غیره رخ می‌دهند اندوتوکسین‌ها در محیط های عادی هم وجود دارند. با توجه به اینکه بیشتر نمونه‌های نانومواد که به منظور انجام آزمون‌های برون تن و یا درون تن انتخاب می‌شوند نیازمند فرایندهای آماده‌سازی مختلفی هستند در صورت عدم مراقبت ویژه ممکن است بوسیله اندوتوکسین‌ها آلوده شوند.
به منظور غربالگری سمیت یا انجام آزمون‌های سازگاری زیستی نانومواد، یا مطالعات روی مکانیسم‌های احتمالی سمیت القا شده بوسیله آن‌ها انواع روش‌های آزمون سلولی برون تن و درون تن توسعه یافته و بکار گرفته شده‌اند در روش‌های آزمون‌های برون تن اغلب ماکروفاژها و یا سایر سلول‌های مربوط به پستانداران به‌عنوان سلول‌های مورد آزمون برای نانو مواد استفاده می‌شوند زیرا سلول‌های مذکور عامل اولیه حفظ و بقای سلول‌ها در بدن هستند از آنجائیکه سلول‌های ماکروفاژی به اندوتوکسین‌ها واکنش‌های شدیدی نشان می‌دهند لذا تشخیص اینکه این پاسخ مربوطه به واکنش اندوتوکسین است یا نانو مواد مشکل است.
در نتیجه آلودگی با اندوتوکسین‌ها می‌تواند نتایج آزمون‌های برون تن را با اشکال مواجه کند. اگر در هنگام آماده‌سازی نمونه‌های آزمون احتیاط رعایت شود احتمالا آلودگی با اندوتوکسین‌ها کاهش می‌یابد بنابراین برای به حداقل رساندن آلودگی و یا به قطعیت رساندن مقادیر ناچیز اندوتوکسین‌ها در نمونه آزمون تشخیص مقدماتی آن‌ها ضروری است برای تفسیر مناسب داده‌هایی که از آزمون برون تن بدست می‌آید بسیار مهم است که مقدار اندوتوکسین‌ها تعیین شود. از آنجائیکه اندوتوکسین‌ها می‌توانند تجهیزات پزشکی و یا داروهای تزریقی را آلوده کنند. روش‌های اندازه‌گیری نیمه کمی و کمی اندوتوکسین‌ها به دوشکل برون تن و درون تن توسعه یافته‌اند. (به پیوست ث مرجع مراجعه کنید آزمون اندوتوکسین باکتریال با استفاده از واکنشگر (Limulus amcbocyte lysate (LAL بعنوان یک روش برون تن جهت ارزیابی آلودگی به اندوتوکسین‌ها توسعه یافته است این آزمون می‌تواند روش جایگزینی برای آزمون تبزایی در خرگوش‌ها و سایر روش‌های شرح داده شده در فارماکوپه بسیاری از کشورها باشد. این استاندارد نکاتی را ارائه می‌کند که برای آزمون LAL جهت نانومواد بکار رفته در انجام آزمون‌های بیولوژیکی برون تن استفاده می‌شود.
هدف از تدوین این استاندارد
هدف از تدوین این استاندارد ارائه کاربرد یک آزمون با استفاده از واکنشگر LAL جهت ارزیابی تانو مواد مورد نظر در سیستم‌های آزمون‌های بیولوژیکی برون تن بر پایه سلولی می‌باشد. این آزمون برای استفاده نمونه‌های نانو مواد توزیع شده در محیط‌های آبی مانند آب، سرم، یا محیط واکنش و همچنین محیط‌های گرم‌خانه گذاری شده با نانومواد برای یک دوره زمانی لازم در ۳۷C مناسب است. این استاندارد به نمونه‌های آزمون برای سیستم‌های برون تن محدود می‌شود اما روش‌های ارائه شده همچنین می‌توانند برای نانو مواد تزریق شده به حیوانات هم تعمیم یابند.